medios de cultivo

Para poder estudiar a un microorganismo en necesario cultivarlo. • Cultivar a un microorganismo es proporcionarle las condiciones adecuadas para su crecimiento y multiplicación. • El objetivo principal de cultivar a un microorganismo es obtener un cultivo axénico; es decir un cultivo puro que se forma a partir de una sola célula.

. •Los nutrientes que requieren los microorganismos son: agua, carbohidratos, nitrógeno, fósforo, azufre, calcio, cobre, etc. • También es necesario brindarle las condiciones ambientales adecuadas de luz, temperatura, oxigenación, humedad, etc. Las bacterias crecen a 37º C y un pH de 6.5- 7.5 y los hongos a 27 C y un pH de 4.5-6. • Para cultivar a los microorganismos es necesario el uso de medios de cultivo. 
¿QUÉ ES UN MEDIO DE CULTIVO? Es una solución líquida o gelatinosa que contiene los nutrientes necesarios para el crecimiento de los microorganismos. 

¿COMO SE CLASIFICAN LOS MEDIOS DE CULTIVO? 

1. Por su consistencia: 
a. Líquidos: también se llaman caldos de cultivo, no contienen agar y se preparan en matraces pequeños
b. Semisólidos: contienen 0.5% de agar y se preparan en matraces pequeños. 
c. Sólidos: contienen de 1.5 a 2% de agar y se preparan en cajas petri (placa) o en tubos de ensaye. 

Por su composición: 
a. Definido: se conoce su composición exacta, se utiliza cuando ya se conocen los microorganismos que se van a cultivar
b. Complejo: no se conoce su composición, pueden tener sangre, leche, extracto de levadura o carne; se utiliza cuando no se conocen a los microorganismos o no se conocen sus requerimientos nutricionales. 
c Mínimo: es un medio definido que proporciona solo los nutrientes necesarios. 


Por su función:
a. Selectivos: promueve o inhibe el crecimiento de los microorganismos 
b. Diferenciales: permiten distinguir entre diferentes tipos de microorganismos. 
c. De enriquecimiento: contiene factores de crecimiento, un nutriente esencial que el microorganismo no puede sintetizar. 

¿COMO SE PREPARAN LOS MEDIOS DE CULTIVO?

La base para su elaboración es un medio deshidratado, un medio que está en polvo al cual hay que disolver en agua y esterilizar.

1. Pesar los medios de cultivo Bacterias: 23 g de agar nutritivo para un litro de agua destilada Hongos: agar, dextrosa y papa y extracto de levadura para un litro de agua destilada 

Colocar el medio de cultivo en polvo en un matraz erlenmeyer y agregar agua destilada 3. Calentar en la parrilla de agitación hasta que el medio este totalmente cristalin

Retirar de la parrilla y colocar un tapón hecho con algodón envuelto en gasas. El tapón debe quedar fijo pero no apretado. 5. Colocar el medio en la autoclave y esterilizar a 121 C durante 20 minutos. 

Pasados los 20 minutos sacar el medio de cultivo y dejar enfriar solo un poco. OJO: en el caso del medio de cultivo para hongos dejar enfriar hasta los 45 C y agregar el antibiótico, es decir la gentamicina (ampolleta). De la gentamicina necesitamos 1 ml para un litro de medio 

Vaciar el medio de cultivo en cajas petri dentro de un campo estéril. En cada caja vaciar aproximadamente 30

ESTERILIZACIÓN

Otra de las técnicas empleadas en microbiología es la esterilización. Esterilizar es eliminar todos los microorganismos presentes en nuestro material. Todos los aparatos, superficies y materiales utilizados para cultivar deben ser esterilizados. 

Para la esterilización se pueden emplear los siguientes métodos y/o agentes: 
1. Métodos físicos:
a. Calor húmedo: autoclave 

Para la esterilización se pueden emplear los siguientes métodos y/o agentes: 
1. Métodos físicos: 
b. Calor seco: estufa y flameado a la llama

Para la esterilización se pueden emplear los siguientes métodos y/o agentes:
1. Métodos físicos: 
c. Rayos ultravioleta d. Filtración

Métodos químicos: 
a. Hipoclorito de sodio, cloro comercial al 10% 
b. Alcohol etílico al 70% 
c. Cloruro de benzalconio